早老素单克隆抗体 [13A4D4] – ImmuQuest

来自 : 发布时间：2024-05-04

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目录号：IQ557

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数据表主要描述：小鼠抗早衰素 [13A4D4] 目标抗原：早衰素目录编号：IQ557 数量：0.1mg 浓度：1mg/ml 克隆：13A4D4 宿主：小鼠 同种型：IgG1 kappaMyeloma/Fusion Partners：X63-Ag8.653 免疫原：与来自 C 末端残基 604 - 611 (GAQSPQNC) 内的 KLH 偶联的合成肽人类早衰物种反应性：人类纯化：蛋白 G 形式：含有 PBS + 0.1% 叠氮化钠的纯化抗体（来自上清液）应用：WB、ICC/IF、ELISA、IP 稀释：最佳抗体稀释应通过滴定确定，但作为指导尝试； WB：1/500。检测大约 70 kDa 的条带Pubmed ID(s)：18192970、21346760 引文引文计数：1 引文：

Liu GH 等。用来自 Hutchinson-Gilford 早衰综合征的 iPSCs 重现过早衰老。自然 472:221-5 (2011)。世界银行、国际商会/国际联合会； HumanView Source

Protocols免疫荧光协议 - 甲醛固定从 T.c.unit 收集细胞并使用抽吸从培养皿中去除培养基。用 1x PBS 清洗并去除。在预热 (37°C) 多聚甲醛中在室温下孵育细胞 12 分钟去除 PFA，并在 1x PBS 中的 0.5% Triton X-100 中室温孵育 5 分钟。准备封闭试剂，这也是抗体稀释剂。在室温下用 1x PBS 洗涤细胞 2x，持续 4 分钟分钟/在定轨摇床上洗涤。在室温下用 1% NCS 和 1x PBS 封闭 30 分钟。准备一抗（50 升/盖玻片）和湿染色室。在室温下用 1x PBS 洗涤细胞 2 次并风干简要地与一抗孵育在室温下在染色室中黑暗中放置 1 小时。在此期间准备二抗。用 1x PBS 洗涤细胞 5 次（更换烧杯 5 次/每个烧杯计数 5 次）在染色室中于室温下在黑暗中用二抗孵育 1 小时。用 1x PBS 洗涤细胞 5 次。Mount在 Dapi 中。

溶液（在染色当天新鲜制备）。

* 1x 磷酸盐缓冲盐水。*封闭试剂：1% NCS 溶于 1x PBS（使用新鲜的 10x PBS）。*固定溶液：3.5%多聚甲醛。

1.75g PFA 溶于 20ml d.H2O 加 5 滴 1M NaOH。在 50-60°C 的热板上搅拌直至溶解。添加 4 滴 IN HCI 并检查 pH 指示剂条。 PH 应为 7.4。用 d.H2O 完成体积至 25ml，并加入 25ml 2xPBS。在添加到盖玻片之前检查 pH 值。

免疫荧光协议 - 甲醇/丙酮固定从 T.C.unit 收集细胞并使用抽吸从培养皿中去除培养基。用 1x PBS 清洗并取出。用冷甲醇：丙酮 1：1 冰上固定细胞 10 分钟。准备再封闭试剂，这也是抗体的稀释剂。去除固定剂并在室温下用 1x PBS 洗涤细胞 3 次，每次 4 分钟/在轨道摇床上洗涤。在室温下用 1% NCS 和 1x PBS 封闭 30 分钟。准备一抗（50 升/盖玻片）和潮湿的染色室。在室温下用 1 x PBS 清洗细胞 2 次，然后风干约 7 分钟。在染色室的黑暗中室温下与一抗孵育 1 小时。在此期间准备二抗。用 1x PBS 洗涤细胞 5 次（更换 5 次烧杯/每个烧杯计数 5 次）在染色室的黑暗中，在室温下用二抗孵育 1 小时。用 1x PBS 洗涤细胞 5 次。在 Dapi 中安装。

溶液（在染色当天新鲜制备）

* 1x 磷酸盐缓冲盐水。*封闭剂：1% NCS 溶于 1x PBS（使用新鲜的 10x PBS） .* 固定溶液：甲醇：丙酮 1:1 冰冷。Western Blotting Protocol 将凝胶转移到 PDVF 或硝酸纤维素膜上 将膜放入封闭缓冲液中的塑料托盘中搅拌 1 小时 在洗涤缓冲液中冲洗 在洗涤缓冲液加一抗中孵育一小时 用洗涤缓冲液洗涤 6 X 5 分钟 在洗涤缓冲液加二抗中孵育一小时 用洗涤缓冲液洗涤 6X 5 分钟 检测（例如 ECL，Amersham 根据厂家说明)Wash buffer

PBS + 0.1% Tween 20

Blocking buffer

Wash buffer + 5% dried milk powder

所用抗体的浓度取决于每种抗体，用量抗原的种类和使用的检测方法。一般稀释度在几百倍到几千倍稀释之间，但通常要凭经验确定。

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